路特斯elise,路特斯Elise

基本方法有：直接法、間接法、雙抗體夾心法和抗原競爭法。

1. 直接ELISA

原理：將抗原連接到固相載體上，通過洗滌去除未結合的抗原和雜質。添加酶標抗體進行孵育。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底清洗未結合的酶標抗體。此時固相上攜帶的酶量與樣品中待測抗原的量有關。添加底物反應。直接法主要用于抗原的測定。

優(yōu)點：操作流程短，實驗步驟少；無需使用二抗，避免交叉反應；更少的實驗步驟，更不容易出錯的操作。

缺點：實驗中的一抗需要直接用酶標記，成本相對較高。

2.間接法ELISA

原理：抗原與固相載體連接形成固相抗原。洗滌以去除未結合的抗原和雜質。加入特異性一抗與固相抗原結合形成固相抗原抗體復合物。洗滌后加入酶標二抗。固相免疫復合物中的抗體與酶標二抗結合，從而間接標記酶。洗滌后加入底物顯色。

優(yōu)點：酶標二抗可以加強信號，提高靈敏度；靈活性更大，同一種酶標二抗可以適用于多種不同的一抗；一抗沒有直接標記，可以保留更多的免疫反應性；成本較低，使用較少的標記抗體。

缺點：增加交叉反應的機會。

3. 雙抗體夾心ELISA

原理：雙抗體夾心法適用于二價或二價以上大分子的測定，不適用于小分子抗原。將特異性抗體（捕獲抗體）連接到固相載體上，形成固相抗體。洗滌以去除未結合的抗體和雜質。添加待測樣品并孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結合形成固相抗原抗體復合物。洗滌以去除其他未結合的物質。添加酶標抗體（檢測抗體）并孵育。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底清洗未結合的酶標抗體。添加底物反應。

雙抗原夾心法檢測抗體的反應模式與檢測抗原相似。特異性抗原用于包被并制備酶結合物以檢測相應的抗體。

優(yōu)點：特異性高，使用的捕獲抗體和檢測抗體具有檢測特異性；適用于復雜樣品，抗原無需純化即可用于檢測；更大的靈活性，更高的靈敏度，直接法或使用間接法。

缺點：檢測物質需要有兩個以上不同的抗原表位或多個相同的重復表位；不適用于小分子物質的檢測。

4. 競爭性ELISA

原理：競爭性ELISA是最復雜的方法，通常用于檢測小分子，如半抗原、激素、藥物等。樣品中待測游離抗原與固定在固相載體上的抗原競爭相同。抗體數(shù)量有限。當樣品中游離抗原較多時，可結合的抗體較多，而固相抗原只能結合較少的抗體。反之亦然。洗滌后去除樣品中的抗原抗體偶聯(lián)物，只留下固相抗原抗體偶聯(lián)物。顯示計算出的樣品中的抗原含量。競爭方法可根據(jù)實驗設置采用直接法、間接法或夾心法等形式。